蛋白質(zhì)純化是指將一種或多種蛋白質(zhì)從復(fù)雜混合物中分離出來(lái)的一系列過(guò)程。蛋白質(zhì)的分離純化廣泛應(yīng)用于生化研究,是一項(xiàng)重要的生物研究技術(shù)。一個(gè)典型的真核細(xì)胞可以包含成千上萬(wàn)種不同的蛋白質(zhì),為了研究某種蛋白質(zhì),必須首先從其他蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)分子中純化該蛋白質(zhì)。
蛋白質(zhì)的純化要用不同蛋白質(zhì)間內(nèi)在差異和相似性去除非蛋白質(zhì)中的污染,用蛋白質(zhì)的差異從其他蛋白質(zhì)中純化出需要的蛋白質(zhì)。因?yàn)槊糠N蛋白質(zhì)的大小、形狀、電荷、疏水性、溶解性和生物活性都是不同的,利用這些差異可以從混合物中提取如結(jié)腸細(xì)菌的裂縫。
在蛋白質(zhì)和抗體的純化工作中,準(zhǔn)確地進(jìn)行定量是很重要的,通過(guò)測(cè)定蛋白質(zhì)的紫外吸收情況來(lái)測(cè)量是目前較為快速方便的一種方法。
蛋白質(zhì)所具有的紫外吸收特性來(lái)自于含有共軛雙鍵的色氨酸、酪氨酸等芳香族氨基酸分子,在280納米附近有zui大的光吸收峰。因?yàn)榇蠖鄶?shù)蛋白質(zhì)含有酪氨酸和色氨酸殘基,在280納米波長(zhǎng)下測(cè)定蛋白質(zhì)的吸光度是分析溶液中蛋白質(zhì)含量的快和簡(jiǎn)單的方法。
紫外吸收法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的優(yōu)點(diǎn)是快速、簡(jiǎn)單、不消耗樣品、低濃度鹽類不干擾。但是,這種方法存在一定的缺點(diǎn),例如在確定那些與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)中酪氨酸含量和鉻含量不同的蛋白質(zhì)時(shí)會(huì)有一定的誤差和干擾。
不同的蛋白質(zhì)和核酸對(duì)紫外線的吸收是不同的。即使經(jīng)過(guò)校正,測(cè)量結(jié)果仍有一定誤差,但可以作為初步定量的依據(jù)。測(cè)量過(guò)程中也需要對(duì)紫外線強(qiáng)度進(jìn)行監(jiān)測(cè),工采網(wǎng)推薦使用紫外光電探測(cè)器和紫外線傳感器:
德國(guó)SGLUX 紫外光電探測(cè)器 - TOCON_ABC10,基于碳化硅的寬頻紫外光電探測(cè)器放于TO5 外殼中,帶有衰減器,高度現(xiàn)代化的電子元件和帶有紫外玻璃窗的密封金屬外殼可消除封裝內(nèi)寄生電阻路徑導(dǎo)致的噪聲或電磁干擾。
韓國(guó)GENICOM 可見(jiàn)光傳感器/紫外線傳感器 - GVBL--T12GD,具有良好的溫度穩(wěn)定性,可以完全屏蔽UVC和UVB波段的紫外線。由于該紫外線-可見(jiàn)光傳感器在太陽(yáng)光下會(huì)有輸出,故使用時(shí)應(yīng)注意避免有環(huán)境光的干擾。
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